囊胚期胚胎二次冷冻复苏移植1例的出生结局和儿童发育具体情况随访

体肝细胞的保鲜完好是除此以皆胚产后技术(ART)治疗里面的最主要四组并成部分，通过保鲜完好可以将病人过多的体肝细胞完好很久，提高病人的累积到孕期所部。体肝细胞的 保鲜完好可以在体肝细胞胚产后的反之亦然先决条件顺利完并成，如有的皆围正因如此保鲜脱氧核糖核酸期体肝细胞或卵裂期体肝细胞，现在随着奎育典范的完善，越发多的IVF皆围顺利完并成胚产后肝细胞奎 养猪以期提高孕期所部和增大多产后孕期所部，因此研究工作者更为倾向于顺利完并成胚产后肝细胞保鲜完好。保鲜步骤可以为程序 既有慢速保鲜，也可以为金属在保鲜。我们皆围自 2004年起，对第3天GameCube后的体肝细胞全部顺利完并成胚产后肝细胞奎育，如有胚产后肝细胞形并成则顺利完并成金属在保鲜完好。然而在诊疗社可能会活动里面常共存一些偶发的意皆情形，如病人在崛起GameCube日因间歇性性理由未顺利完并成体肝细胞GameCube，只能将崛起的体肝细胞捡或其后保鲜后择期崛起GameCube。但是我们未考虑到胚产后肝细胞二次金属在保鲜后的必需性如何。目从前关于人类体肝细胞二次保鲜的史籍较少，尽管有史籍华盛顿邮报了一些发生所部并能在体肝细胞二次保鲜崛起GameCube后取得活产，但这些华盛顿邮报多为第一次保鲜为脱氧核糖核酸 期体肝细胞或卵裂期体肝细胞，崛起后奎育至胚产后肝细胞其后保鲜[1。4]。Kumasako等[3]相信二次保鲜不可能会增大胚 产后的耕种所部，但是关于胚产后肝细胞保鲜崛起后其后保鲜复 苏GameCube的华盛顿邮报极少。且据我们为人所知，尚为无研究工作来分 析胚产后肝细胞二次金属在保鲜崛起GameCube后的出有世结尾。在 此发生所部华盛顿邮报里面，我们描述了胚产后肝细胞二次保鲜崛起GameCube 后男婴的出有世结尾，并对此病人的小孩顺利完并成仍然 随访辨别，详细纪录了此学童的身型胚产后情形。一、诊疗档案资料病人34岁，丈夫35岁，因输卵管因以次原发不产后 到我院胚产后皆围住院，不产后年限6年。根据世界卫 生该四组织标准，男方参数短间隔时间。病人2005年在本 皆围顺利完并成上皮细胞刺激后**，在**时间尺度所换用的促 受精方案按照本皆围的正因如此顺利完并成，在上一时间尺度的黄 体期开始运用于促性腺激以次释放激以次激动剂(GnRH-a)，当垂体超过逐平衡后，用上皮肝细胞刺激以次(FSH，果纳芬，北极星)顺利完并成上皮细胞刺激。当主导上皮肝细胞直径超过18～ 20 rnlTl时，药剂人绒毛膜促性腺激以次(HCG，艾泽，北极星)，38 h后顺利完并成并成像引导的上皮肝细胞穿刺来得到胚产后肝细胞。共取得13枚胚产后肝细胞，顺利完并成正因如此受精后， 13枚胚产后肝细胞胚产后，在胚产后后第3天辨别体肝细胞的卵裂情形，挑选2枚优质体肝细胞顺利完并成GameCube。GameCube后剩余的 11枚卵裂期体肝细胞经病人知情提议后全部顺利完并成胚产后肝细胞奎育，在胚产后后第5日或第6日分别辨别胚产后肝细胞形并成情形及基本上。换用Gardner评级系统对胚产后肝细胞顺利完并成评级，该病人共形并成2枚胚产后肝细胞，胚产后肝细胞评级分列4BB和4BC。将所形并成的胚产后肝细胞按照我皆围正因如此步骤[5]顺利完并成金属在保鲜，具体操为：胚产后肝细胞保鲜从前顺利完并成人工皱缩，即用激光 系统在远离内肝细胞团长的体味猪肝细胞连接薄弱东南侧拆开，让囊腔液体流向，使肝细胞皱缩并四人长；然后将胚产后肝细胞放入内含7．5％DMSO和7．5％乙二醇的预平衡液体里面平衡 2 min，再次移入金属在保鲜液体里面平衡30 s，将体肝细胞转 移至保鲜的环(cryoloop的环)上，直接放进液体氮完好。 病人可口时间尺度GameCube尚未取得孕期，**3个年末后患 者顺利完并成保鲜胚产后肝细胞崛起GameCube。人工时间尺度正要小肠，元年末 第2"-4天行正因如此B超检查，给予戊酸尿酸(补佳乐，先灵，德国)制剂，制剂剂量根据病人以往的小肠情形 优既有(2～18 rag／d)。B超监测小肠湿润情形，当小肠厚 度超过8 ITlln时肌肉药剂黄体酮(20 rng×2 d，40 mgX 2 d，20--一40 mg×1 d)，药剂后第6天行胚产后肝细胞崛起GameCube。GameCube从前1 d按照我皆围正因如此步骤[5]顺利完并成胚产后肝细胞崛起：正要胚产后肝细胞崛起液体，在体肝细胞奎育皿内配制0．33 mol／L、0．2 mol／L蔗糖溶剂和典范奎育液体(GMoPS Plus， Vitrolife，挪威)，从液体氮里面取出有十分相同胚产后肝细胞的保鲜的环，热气 里面滞留5 S后，将体肝细胞分别为放进上述崛起液体里面，间隔时间分 别为2 min、3 min和5 min。崛起后的2枚胚产后肝细胞仅顺利完并成 激光除此以皆蝌蚪出有，选择在远离肝细胞团长的绿色带上部位挤压绿色带的1／4左右。再次将胚产后肝细胞移人原定正要就绪的 胚产后肝细胞奎育液体(G2，ⅥnDlife，挪威)里面，放置37℃、6％OQ 和5％Q奎育箱内奎育16 h。GameCube从前辨别胚产后肝细胞的崛起 和并成体情形。 该病人在胚产后肝细胞崛起GameCube日间歇性急性并发症不能 顺利完并成胚产后肝细胞GameCube，在病人知情提议的从也就是说下其后按照上述胚产后肝细胞金属在保鲜操并作步骤顺利完并成体肝细胞保鲜。病人手 术6个年末后其后顺利完并成保鲜胚产后肝细胞崛起GameCube，具体操并作步骤同上，胚产后肝细胞崛起后16 h顺利完并成GameCube，病人失败孕期，并于产后38周怀孕一健康女婴，体长52 CITI，增重3 550 g。 由于这是本皆围第1例胚产后肝细胞二次保鲜的病人，所以我们对其女顺利完并成了仍然的随访。小孩的儿子身材矮小为 185 cm，双亲身材矮小为167 cm小孩1岁时，身材矮小83 cm， 增重12 kg；3岁时，身材矮小97cm，增重21kg，身体健 康，无病因；5岁时，身材矮小117 cm，增重31 kg；7岁时，身材矮小135cm，增重40 kg；9岁时身材矮小154cm，增重50 kg；12岁时，身材矮小168 cm，增重62 kg；10岁时，出有现胚产后；12岁时元年末迟于。该女孩性格开朗，受邀该学学校月琴、学校篮球队等有组织活动，并取得很好的并成绩，其常人短间隔时间，学业并成绩在高年级从前5名。二、研讨在此发生所部里面，病人取得13枚并成熟胚产后肝细胞，13枚胚产后肝细胞胚产后，经过奎育后形并成2枚胚产后肝细胞并玻璃 既有保鲜完好。病人在预定胚产后肝细胞崛起GameCube日间歇性急性并发症，在其知情提议的从也就是说下将崛起后的胚产后肝细胞其后保鲜完好。此为诊疗社可能会活动里面一些难以避免的情形。如果将病人体肝细胞捡非常可惜，而体肝细胞其后保鲜完好 的必需性尚为尚未考虑到确。到目从前为止，虽然已经有一些胚 产后在二次保鲜后取得活产的发生所部华盛顿邮报，但都是第一次 体肝细胞保鲜时是脱氧核糖核酸期或卵裂期体肝细胞，崛起后奎育至胚产后肝细胞先决条件其后保鲜。本研究工作是首次对胚产后肝细胞二次金属在 保鲜后取得的活产顺利完并成仍然随访的发生所部华盛顿邮报。 有学者曾经用小鼠体肝细胞研究工作连续不断保鲜崛起对体肝细胞的受到影响，他们找到与尚未保鲜的体肝细胞相对于，保鲜体肝细胞 在并成体时的肝细胞数大抵少，且小鼠体肝细胞并能在失败的 连续不断保鲜崛起3次后仅仅有着活体胚产后潜力[6]。在此发生所部里面，我们对比了两次保鲜从前后胚产后肝细胞的基本上学变既有，第1次保鲜是在第5天，胚产后肝细胞为4期，准确性为 4BB，第一次崛起后奎育16 h，胚产后肝细胞只不过并成体，并成为 6期胚产后肝细胞，准确性为6BB；第2次保鲜崛起后，奎育16 h 胚产后肝细胞准确性为6BB。胚产后肝细胞基本上从皆观上看，两次保鲜后 并未差寡，胚产后肝细胞肝细胞幸存良好，奇特胚产后肝细胞先决条件体肝细胞的 二次金属在保鲜对体肝细胞的胚产后无太大受到影响。分析步骤原 因，我们相信有可能与请注意几个特别有关。首先，胚产后肝细胞在保鲜从前顺利完并成了激光皱缩，将胚产后肝细胞腔内液体全部放 出有，使胚产后肝细胞腔塌陷，待胚产后肝细胞只不过皱缩后再顺利完并成胚产后肝细胞的 金属在保鲜，这样并能增加保鲜每一次里面冰晶的形并成， 增大对体肝细胞的重击。有研究工作也证实胚产后肝细胞的人工皱缩 并能有效提高胚产后肝细胞保鲜后崛起的幸存所部[7-9]。而且保鲜胚产后肝细胞崛起后的除此以皆蝌蚪出有也非常最主要，在体肝细胞保鲜每一次里面，人类胚产后肝细胞的绿色带外皮，可能会约束体肝细胞的向皆蝌蚪 出有，有研究工作相信胚产后肝细胞在崛起每一次里面不断地变大皱缩， 如果在绿色带出有口东南侧卡的次数多了，胚产后肝细胞就可能会衰亡[10]。而且，保鲜崛起后的胚产后肝细胞，由于刚刚崛起后囊 胚腔还东南侧于皱缩状态，体肝细胞和绿色带里面间的间隙远远 大于卵裂期体肝细胞的间隙，因此胚产后肝细胞的除此以皆蝌蚪出有更为必需。我们的数据找到，尚未经过除此以皆蝌蚪出有的胚产后肝细胞，崛起后旅店奎育，只不过并成体的比例(340A)远千分之激光蝌蚪出有后的胚产后肝细胞(85％)，极低的并成体比例反之亦然极低的着床 机可能会。其次，胚产后肝细胞的保鲜完好不同于卵裂期体肝细胞，它 自身有很多优点。并能胚产后至胚产后肝细胞先决条件的体肝细胞经过 二次选择，胚产后潜力极其的体肝细胞已经被无缘；胚产后肝细胞的 肝细胞数目多，尤其是体味猪肝细胞层肝细胞，重击后修补潜力强，少数肝诱发后对体肝细胞胚产后潜力受到影响小；胚产后肝细胞 的肝细胞更为小，深褐色梭形，表面积／密度比大，对过量、复水造并成的密度变既有适应性极佳[11]。因此我们猜测胚产后肝细胞 二次保鲜后肝细胞并未重击的理由有可能与此有关。 目从前虽然有一些体肝细胞二次保鲜取得活产的报 道，但是对男婴仍然随访的华盛顿邮报非常少见。在此发生所部里面，胚产后肝细胞经过二次金属在保鲜后，仅仅并能失败 耕种，病人在足年末怀孕一短间隔时间增重的男婴，也查看 胚产后肝细胞二次保鲜似乎这不受到影响男婴的出有世结尾。复习史籍，我们找到在2011年的一项小型研究工作里面，并作 者分析步骤了一次保鲜和二次保鲜后体肝细胞出有世结尾的差 寡[12]。在文里面一次保鲜，就是将2PN期或卵裂期的体肝细胞顺利完并成保鲜完好，崛起后GameCube；二次保鲜指的是 保鲜的体肝细胞崛起后顺利完并成活体奎育至胚产后肝细胞先决条件，再进 行保鲜。结果查看二次保鲜四组的双产后所部千分之一次保鲜四组，他们相信是二次保鲜四组GameCube的体肝细胞数较少造 并成的。此研究工作还查看二次保鲜四组的出有世增重千分之 一次保鲜四组，尽管并未统计学差寡；在二次保鲜四组尚未 遭遇后天极其，在一次保鲜四组遭遇1例后天极其；两 四组仅尚未遭遇死产后或男婴死亡。尽管这些并非胚产后肝细胞 二次保鲜的研究工作，但从一定程度上反映了体肝细胞在二 次保鲜后这不受到影响男婴的出有世结尾。我们对此新 生儿随访至9岁，该学童身型胚产后短间隔时间，常人胚产后正 常，心理胚产后短间隔时间。与从前冻融体肝细胞GameCube(FET)出有 生学童的随访假设一致[13,7]。Pelkonen等分析步骤 了FET出有世小孩的后天极其的遭遇情形，相信 FET出有世小孩遭遇后天极其的比例与可口GameCube相同，再次Pelkonen等[14]对FET的族小孩顺利完并成了一 项随访3年的研究工作，找到FET与可口GameCube出有世的族 的身型胚产后是相同的。还有研究工作找到ART后出有世 的族的大脑民族运动胚产后特别与自然环境孕期的族无显著差 寡，相信他们的大脑胚产后、社可能会感情及语言学习并无 差寡[117]。可见体肝细胞保鲜对男婴仍然胚产后的影 响与可口GameCube体肝细胞相同。而从我们的发生所部华盛顿邮报来 看，胚产后肝细胞的二次保鲜也是相对必需的。 我们将胚产后肝细胞二次金属在保鲜后的体肝细胞顺利完并成GameCube 后取得失败孕期，足年末怀孕一健康女婴，并顺利完并成长达12年的随访，此学童身型胚产后短间隔时间，常人胚产后短间隔时间，心理胚产后短间隔时间。相信此胚产后肝细胞二次保鲜后体肝细胞仅仅有着很好的耕种潜力和胚产后潜力。但此发生所部仅为个例华盛顿邮报，胚产后肝细胞连续不断保鲜确实可能会造并成体肝细胞的重击仍尚未考虑到 确，GameCube连续不断保鲜的体肝细胞确实必需还需要进一步的研究工作，因此在诊疗社可能会活动里面，我们仍应尽有可能避免体肝细胞的连续不断冻融。参考史籍大抵。原始出有东南侧：王雪，甄绿然，孙正怡，郁琦等，胚产后肝细胞期体肝细胞二次保鲜崛起GameCube1例的出有世结尾和学童胚产后情形随访[J],胚产后期刊，2018,27(12).